环境微生物监测标准操作规程

（一）监测指征

1、感染暴发或感染流行时，怀疑与环境因素有关时。

2、监测潜在的危险环境状况，证明有危险的病原体存在或证明危险的病原体已被成功清除。

3、当某项感染控制措施改变时，评估其效果；或者根据规范要求，仪器设备或系统启用时监测。

4、目标性监测的需要。

5、循证医学证据支持。

（二）空气监测(沉降法)

1、采样时间：消毒处理后、进行医疗活动之前。

2、采样高度：距地面垂直高度80～150cm。

3、采样点设置

1）非洁净房间：室内面积≤30㎡，在对角线上设里、中、外3点。里、外两点位置各距墙1m；室内面积>30㎡，设东、西、南、北、中5点。其中东、西、南、北4点均距墙1m。将9cm直径普通营养琼脂平板放置各采样点，采样时将平皿打开，扣放在平皿旁，暴露规定时间后，盖上平皿盖及时送检。

2）洁净房间：清洁房间在空态或静态条件下，根据房间的不同清洁级别进行布点，操作按照GB/50333—2002。9cm直径普通营养琼脂平板在采样点暴露30min后送检培养。

4、采样注意事项

1）采样前，关闭门窗，消毒后在无人走动的情况下，静止10 min后采样。

2）采样人员做好手部卫生，佩戴口罩、帽子等个人防护装备。

3）平皿盖打开顺序应先内后外；手臂及头不可越过培养皿上方；行走及放置动作要轻，尽量减少对空气流动状态的影响；平皿盖应扣放，以防污染。

4）采样结束后，由外向内合上平皿盖。

5）采样完毕的培养皿应及时送达细菌室。

5、细菌室检测

1．培养皿在37℃培养48h后，进行菌落计数和致病菌检验。

(1）普通营养琼脂培养基的配制按照GB／—2003；

(2)菌落计数方法按照2012年8月1日实施《医疗机构消毒技术规范》要求：沉降法按平均每皿的菌落数报告：cfu/（皿.暴露时间）；

(3)致病菌检验：溶血性链球菌检验按照GB／—2003，沙门菌检验按照CB/—2003，铜绿假单胞菌检验按照GB／—1987，金黄色葡萄球菌检验按照CB/—1987。

6、结果判断：

1）洁净手术部和其他洁净场所：空气中的细菌菌落总数要求应遵循GB/50333规定。

2）非洁净手术室、非洁净骨髓移植病房、产房、导管室、新生儿室、器官移植病房、烧伤病房、重症监护病房、血液病病区空气中的细菌菌落总数≤4cfu/15min。

3）儿科病房、母婴同室、妇科检查室、人流室、治疗室、注射室、换药室、输血科、消毒供应中心、血液透析中心（室）、急诊室、化验室、各普通病室、感染疾病科门诊及病房空气中的细菌菌落总数≤4cfu/5min。

（三）物体表面监测

1、采样时间：

1）消毒处理后4h内。

2）怀疑与医院感染暴发有关时。

2、采样方法

被采样本面积<100c㎡取全部表面；如采样面积≥100c㎡，连续采样4个位置(不可有重叠)，每个位置采5cm×5cm的大小，用浸有无菌生理盐水的棉拭子1支，在规格板内横竖往返均匀涂擦各5次，并随之转动棉拭子，将棉拭子投入10ml无菌生理盐水试管内；不规则的物体表面，用棉拭子直接涂擦，采样面积≥30c㎡

3、实验室检验

1）取1mL倾注培养，平行双份。37℃培养48h，进行菌落计数和致病菌检验。普通营养琼脂培养基的配制按照GB／T4789．28—2003；菌落计数方法按照(3B／T7918．2—1987；致病菌检验与空气监测相同。

2）计算公式：

A、规则物体表面：细菌总数(cfu／c㎡)=(平均每皿菌落数×洗脱液稀释倍数)／采样面积(c㎡。)

B、小型物体表面：用CFU/件表示。

4、结果判断：参照2012年8月1日实施《医疗机构消毒技术规范》。

1）洁净手术部、其它洁净场所、非洁净手术部、非洁净骨髓移植病房、产房、导管室、新生儿室、器官移植病房、烧伤病房、重症监护病房、血液病病区物体表面细菌菌落总数≤5cfu/cm².

2）儿科病房、母婴同室、妇科检查室、人流室、治疗室、注射室、换药室、输血科、消毒供应中心、血液透析中心（室）、急诊室、化验室、各普通病室、感染疾病科门诊及病房物体表面细菌菌落总数≤10cfu/ cm²。